協同生物(wù)非酒精性脂肪肝（NAFLD）包含了(le)一系列的(de)疾病發展階段，從一般脂肪變性進展到脂肪變性與炎症并發的(de)非酒精性脂肪肝炎（NASH），随後進展爲肝纖維化(huà)、肝硬化(huà)和(hé)肝癌。大(dà)多(duō)數肥胖的(de)成年人(rén)有脂肪肝型态，他(tā)們的(de)患病率達到30%以上，因此，NAFLD的(de)患病率會随著(zhe)肥胖率的(de)升高(gāo)而升高(gāo)。
爲研究NAFLD的(de)發病機制并找出治療方法，建立動物(wù)模型是至關重要的(de)一步。科研人(rén)員(yuán)大(dà)多(duō)利用(yòng)高(gāo)脂飼料誘導大(dà)鼠建立NAFLD模型，但近幾年建立的(de)NAFLD動物(wù)模型所采用(yòng)的(de)高(gāo)脂飼料配方、建模周期均不一緻，在研究方面具有不同的(de)參考價值。本文對(duì)多(duō)種高(gāo)脂飼料誘導大(dà)鼠建立NAFLD模型的(de)方法進行總結，如有疑問，歡迎與我們的(de)技術團隊討(tǎo)論。
飼養環境
環境是飼養實驗動物(wù)的(de)必要條件之一，對(duì)于實驗動物(wù)的(de)成活率有著(zhe)很大(dà)的(de)影(yǐng)響，在相關論文中對(duì)溫度和(hé)濕度幾乎都有詳細叙述，并強調了(le)它的(de)重要性。考慮到NAFLD模型對(duì)環境并無特殊要求，所以科研人(rén)員(yuán)一般采取了(le)22±2℃，濕度50%-60%，12小時(shí)循環照(zhào)明(míng)的(de)普通(tōng)飼養環境。
不過值得(de)注意的(de)是，大(dà)鼠對(duì)于環境的(de)變化(huà)很敏感，因此要保證飼養環境各項指标的(de)穩定。同時(shí)由于高(gāo)脂飼料的(de)緣故，大(dà)鼠的(de)排洩物(wù)異味更重，需要及時(shí)更換墊料，飼料和(hé)飲水(shuǐ)也(yě)需要滅菌處理(lǐ)，以免對(duì)實驗造成不必要的(de)影(yǐng)響。
實驗大(dà)鼠的(de)選擇
作爲實驗的(de)受體，大(dà)鼠的(de)選擇十分(fēn)重要，這(zhè)不僅關系到實驗成本，也(yě)決定了(le)建模的(de)質量及周期。
清潔級别
對(duì)于大(dà)鼠的(de)清潔級别選擇，綜合多(duō)篇參考文獻，即便使用(yòng)普通(tōng)動物(wù)，對(duì)實驗結果也(yě)沒有明(míng)顯影(yǐng)響，但考慮到降低大(dà)鼠死亡率和(hé)實驗成本，清潔級别越高(gāo)的(de)大(dà)鼠無疑是越好的(de)。
種類選擇
對(duì)于實驗大(dà)鼠的(de)選擇主要有Wistar大(dà)鼠和(hé)SD大(dà)鼠。其中SD大(dà)鼠相對(duì)發育更快(kuài)，适應能力更強，更利于建模；缺點是價格較高(gāo)，性格更兇猛。綜合考慮，我們認爲SD大(dà)鼠仍然是更好的(de)選擇，但如果預算(suàn)較少也(yě)可(kě)以選擇前者。
性别選擇
在查閱參考的(de)十多(duō)篇文獻中，科研人(rén)員(yuán)無一例外的(de)選擇了(le)雄性大(dà)鼠。由于成年的(de)雌性動物(wù)代謝存在著(zhe)明(míng)顯的(de)周期性，這(zhè)可(kě)能會對(duì)實驗造成影(yǐng)響，所以在大(dà)部分(fēn)實驗中，科研人(rén)員(yuán)更傾向于選擇雄性大(dà)鼠進行實驗。
體重選擇
成年大(dà)鼠的(de)體重可(kě)達300g，考慮到實驗時(shí)間一般爲8-12周，我們認爲選取5-6周，即120g-200g的(de)大(dà)鼠比較合适。值得(de)注意的(de)是，大(dà)鼠之間的(de)體重差異必須小于10%，以免引入無關的(de)變量，對(duì)實驗結果造成幹擾。
高(gāo)脂飼料配方
高(gāo)脂飼料的(de)配方無疑是NAFLD建模最關鍵的(de)因素之一，合适的(de)高(gāo)脂飼料可(kě)以實現低死亡率低，快(kuài)速建立模型的(de)目标。以下(xià)我們将對(duì)于高(gāo)脂飼料的(de)配方進行詳細探討(tǎo)。
豬油含量
豬油含量是高(gāo)脂飼料的(de)核心，更高(gāo)的(de)豬油含量可(kě)以快(kuài)速建立NAFLD模型，但會影(yǐng)響大(dà)鼠食欲及死亡率；豬油含量過低則會造成建模周期長(cháng)，症狀不明(míng)顯。在《高(gāo)脂血症非酒精性脂肪肝大(dà)鼠模型的(de)建立》中，科研人(rén)員(yuán)雖然采用(yòng)了(le)42%豬油含量的(de)高(gāo)脂飼料在第8周建模成功，但個(gè)人(rén)認爲并不可(kě)取，因爲如此高(gāo)的(de)豬油含量會大(dà)幅度提高(gāo)大(dà)鼠死亡率。我們建議(yì)使用(yòng)10%豬油含量的(de)高(gāo)脂飼料，可(kě)以在12-16周得(de)到症狀較明(míng)顯的(de)NAFLD模型，而且在環境适宜的(de)情況下(xià)，通(tōng)常不會有大(dà)鼠死亡。如果要縮短建模周期，可(kě)以适當提高(gāo)豬油含量，但需要加入其它物(wù)質來(lái)促進吸收。
其它物(wù)質
由于高(gāo)脂飼料在适口性方面不如常規飼料，會導緻大(dà)鼠采食量下(xià)降，在一些實驗中甚至出現了(le)實驗組大(dà)鼠體重低于對(duì)照(zhào)組的(de)情況。所以很多(duō)研究人(rén)員(yuán)在高(gāo)脂飼料中添加了(le)膽鹽（1%），以提高(gāo)大(dà)鼠食欲，促進消化(huà)吸收。同時(shí)也(yě)可(kě)以在飼料中添加膽固醇（1%-5%），以促進脂肪肝的(de)形成，縮短建模周期。
建模周期
建模周期和(hé)許多(duō)因素相關，不能一概而論。例如高(gāo)脂飼料中的(de)豬油含量對(duì)建模周期的(de)影(yǐng)響就非常大(dà)。以下(xià)我們将討(tǎo)論使用(yòng)10%豬油含量飼料前提下(xià)所需的(de)建模周期。
在《高(gāo)脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大(dà)鼠模型的(de)建立》中，研究人(rén)員(yuán)在8周停止建模，解剖大(dà)鼠，表明(míng)建模成功，但症狀較輕，大(dà)部分(fēn)大(dà)鼠處于輕度和(hé)中度肝炎。而上文提到的(de)研究中，建模時(shí)間長(cháng)達16周，但症狀明(míng)顯，大(dà)部分(fēn)大(dà)鼠處于中度和(hé)重度肝炎。綜上所述，可(kě)以證明(míng)12-16周是比較合适的(de)建模周期，具體時(shí)間可(kě)結合需要選擇。
木(mù)棒磨牙
在《非酒精性脂肪肝動物(wù)模型的(de)建立與思考》中，科研人(rén)員(yuán)考慮到高(gāo)脂飼料質地偏軟，所以爲實驗組大(dà)鼠提供了(le)木(mù)棒磨牙，結果确實提高(gāo)了(le)大(dà)鼠存活率，體重也(yě)是實驗組高(gāo)于對(duì)照(zhào)組的(de)理(lǐ)想狀況。
剔除肥胖基因抵抗大(dà)鼠
《高(gāo)脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大(dà)鼠模型的(de)建立》一文中探討(tǎo)了(le)肥胖抵抗基因大(dà)鼠對(duì)于建立NAFLD模型的(de)影(yǐng)響。實驗結果表明(míng)，在同樣的(de)飼養條件下(xià)，肥胖抵抗基因大(dà)鼠的(de)症狀确實輕于普通(tōng)大(dà)鼠，這(zhè)不利于NAFLD模型的(de)建立，所以在實驗前應當将其剔除。
總結
高(gāo)脂飼料誘導大(dà)鼠建立NAFLD模型，應選擇120-200g的(de)雄性SD大(dà)鼠，剔除肥胖抵抗基因大(dà)鼠；環境溫度應控制在22℃左右，濕度50%-60%；喂養10%豬油含量的(de)高(gāo)脂飼料，可(kě)添加膽鹽和(hé)膽固醇，在12-16周基本可(kě)以建模成功。
本文參考資料來(lái)源：
1.《高(gāo)脂血症非酒精性脂肪肝大(dà)鼠模型的(de)建立》劉慶豐/李中東/施孝金著；
2.《高(gāo)脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大(dà)鼠模型的(de)建立》王瑩/王鴻/蔡東聯著；
3.《大(dà)鼠非酒精性脂肪肝模型構建的(de)方法探討(tǎo)》楊曉紅/徐富翠/餘鴻著；
4.《非酒精性脂肪肝動物(wù)模型的(de)建立與思考》王敏/闫曙光(guāng)著
